Что значит чувствителен при стандартном режиме дозирования

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИБИОТИКАМ:
МЕТОДЫ, РЕЗУЛЬТАТЫ, ОЦЕНКА

Решедько Галина Константиновна,
к.м.н., ассистент кафедры клинической фармакологии
Смоленской государственной медицинской академии
214019, г.Смоленск, ул.Крупской, 28, а/я № 5.
Тел.: +7(0812) 61 13 01, 61 13 27, Факс: (0812) 61 12 94,
E-Mail: galina@antibiotic.ru

Содержание

Резюме

В лекции рассмотрены основные методы определения чувствительности in vitro микроорганизмов к антимикробным препаратам (диско-диффузионный, Е-тестов, методы разведения). Отражены подходы к эмпирическому и этиотропному назначению антибиотиков в клинической практике. Обсуждены вопросы интерпретации результатов определения чувствительности с клинической и микробиологической точек зрения.

В настоящее время в клинической практике существуют два принципа назначения антибактериальных препаратов: эмпирическое и этиотропное. Эмпирическое назначение антибиотиков основано на знаниях о природной чувствительности бактерий, эпидемиологических данных о резистентности микроорганизмов в регионе или стационаре, а также результатах контролируемых клинических исследований. Несомненным преимуществом эмпирического назначения химиопрепаратов является возможность быстрого начала терапии. Кроме того, при таком подходе исключаются затраты на проведение дополнительных исследований.

Эмпирическое назначение антибиотиков основано на знаниях о природной чувствительности бактерий, эпидемиологических данных о резистентности микроорганизмов в регионе или стационаре и результатах контролируемых клинических исследований

Однако при неэффективности проводимой антибактериальной терапии, при нозокомиальных инфекциях, когда затруднительно предположить возбудителя и его чувствительность к антибиотикам стремятся проводить этиотропную терапию. Этиотропное назначение антибиотиков предполагает не только выделение возбудителя инфекции из клинического материала, но и определение его чувствительности к антибиотикам. Получение корректных данных возможно только при грамотном выполнении всех звеньев бактериологического исследования: от взятия клинического материала, транспортировки его в бактериологическую лабораторию, идентификации возбудителя до определения его чувствительности к антибиотикам и интерпретации полученных результатов.

Этиотропное назначение антибиотиков основано на выделении возбудителя инфекции из очага инфекции и определении его чувствительности к антибиотикам

Вторая причина, обусловливающая необходимость определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам — это получение эпидемиологических данных о структуре резистентности возбудителей внебольничных и нозокомиальных инфекций. В практике эти данные используют при эмпирическом назначении антибиотиков, а также для формирования больничных формуляров.

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы: диффузионные и методы разведения.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам: диффузионные методы с использованием дисков с антибиотиками с помощью Е-тестов методы разведения разведение в жидкой питательной среде (бульоне) разведение в агаре

При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по McFarland) и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35 о -37 о С в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах (рис. 1).

Рисунок 1. Определение чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом.

Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (рис. 2). В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Рисунок 2. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов.

Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.

Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35 о -37 о С проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 3).

Минимальная подавляющая концентрация (МПК) — наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий

Рисунок 3. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде.

Интерпретация результатов определения чувствительности

На основании получаемых количественных данных (диаметра зоны подавления роста антибиотика или значения МПК) микроорганизмы подразделяют на чувствительные, умеренно резистентные и резистентные (рис. 4). Для разграничения этих трех категорий чувствительности (или резистентности) между собой используют так называемые пограничные концентрации (breakpoint) антибиотика (или пограничные значения диаметра зоны подавления роста микроорганизма).

Рисунок 4. Интерпретация результатов определения чувствительности бактерий в соответствии со значениями МПК.

Пограничные концентрации не являются неизменными величинами. Они могут пересматриваться, в зависимости от изменения чувствительности популяции микроорганизмов. Разработкой и пересмотром критериев интерпретации занимаются ведущие специалисты (химиотерапевты и микробиологи), входящие в специальные комитеты. Одним из них является Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам США (National Committee for Clinical Laboratory Standards — NCCLS). В настоящее время стандарты NCCLS признаны в мире и используются как международные для оценки результатов определения чувствительности бактерий при многоцентровых микробиологических и клинических исследованиях.

Существуют два подхода к интерпретации результатов определения чувствительности: микробиологический и клинический. Микробиологическая интерпретация основана на анализе распределения значений концентраций антибиотика, подавляющих жизнеспособность бактерий. Клиническая интерпретация основана на оценке эффективности антибактериальной терапии.

Чувствительные микроорганизмы (susceptible)

Клинически к чувствительным относят бактерии (с учетом параметров, полученных in vitro), если при лечении стандартными дозами антибиотика инфекций, вызываемых этими микроорганизмами, наблюдают хороший терапевтический эффект.

При отсутствии достоверной клинической информации подразделение на категории чувствительности базируется на совместном учете данных, полученных in vitro, и фармакокинетики, т.е. на концентрациях антибиотика, достижимых в месте инфекции (или в сыворотке крови).

Резистентные микроорганизмы (resistant)

К резистентным (устойчивым) относят бактерии, когда при лечении инфекции, вызванной этими микроорганизмами, нет эффекта от терапии даже при использовании максимальных доз антибиотика. Такие микроорганизмы имеют механизмы резистентности.

Микроорганизмы c промежуточной резистентностью (intermediate)

Клинически промежуточную резистентность у бактерий подразумевают в случае, если инфекция, вызванные такими штаммами, может иметь различный терапевтический исход. Однако лечение может быть успешным, если антибиотик используется в дозировке, превышающей стандартную, или инфекция локализуется в месте, где антибактериальный препарат накапливается в высоких концентрациях.

С микробиологической точки зрения к бактериям с промежуточной резистентностью относят субпопуляцию, находящуюся в соответствии со значениями МПК или диаметра зон, между чувствительными и резистентными микроорганизмами. Иногда штаммы с промежуточной резистентностью и резистентные бактерии объединяют в одну категорию резистентных микроорганизмов.

Необходимо отметить, что клиническая интерпретация чувствительности бактерий к антибиотикам является условной, поскольку исход терапии не всегда зависит только от активности антибактериального препарата против возбудителя. Клиницистам известны случаи, когда при резистентности микроорганизмов, по данным исследования in vitro, получали хороший клинический эффект. И наоборот, при чувствительности возбудителя может наблюдаться неэффективность терапии.

В определенных клинических ситуациях, когда недостаточно результатов исследования чувствительности обычными методами, определяют минимальную бактерицидную концентрацию.

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) — наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая при исследовании in vitro вызывает гибель 99,9% микроорганизмов от исходного уровня в течение определенного периода времени.

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) — это наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая при исследовании in vitro вызывает гибель 99,9% микроорганизмов от исходного уровня в течение определенного периода времени

Значение МБК используют при терапии антибиотиками, обладающими бактериостатическим действием, или при отсутствии эффекта от антибактериальной терапии у особой категории больных. Частными случаями для определения МБК могут быть, например, бактериальный эндокардит, остеомиелит или генерализованные инфекции у пациентов с иммунодефицитными состояниями.

В заключение хотелось бы отметить, что на сегодняшний день не существует методов, которые позволили бы с абсолютной достоверностью прогнозировать клинический эффект антибиотиков при лечении инфекционных болезней. Однако, данные результатов определения чувствительности могут служить хорошим ориентиром клиницистам для выбора и коррекции антибактериальной терапии.

Таблица 1. Критерии интерпретации чувствительности бактерий

Источник

Анализ на чувствительность к антибиотикам: типы исследований, полученные результаты и расшифровка

Общие сведения об анализе

Анализ на чувствительность к антибиотикам – лабораторный тест, который определяет тип возбудителя, общий объем патогенных сред. Перед тем, как сдавать анализ, требуется подготовиться. Обычно исследование назначают на утро. Пациентам не рекомендуется подмываться, промывать носовые ходы, умываться. Нельзя принимать антибиотики из-за риска получения ложных результатов. О том, как сдавать анализ правильно, расскажет лечащий врач.

Анализ на чувствительность к антибиотикам показан для изучения типа бактерий, определения медикаментозной терапии.

Основная цель заключается в определении типа бактерии, ее устойчивости или чувствительности к различным группам антибиотиков.

Показания и исследуемые пробы

Основными показаниями к назначению анализа являются острые воспалительные процессы бактериальной природы и составление плана дальнейшего ведения пациента. Анализ применяется в хирургии, урологии, нефрологии, онкологии других отраслях медицины.

Исследуемый биологический материал зависит от текущего клинического анамнеза пациента, локализации воспалительного очага. При обширном сепсисе рекомендуется развернутое изучение всех биологических материалов. Для исследования подходят:

1. Кровь. Биохимический развернутый гемотест помогает определить не только тип возбудителя, но и общее состояние организма в целом.
2. Урина. Бакпосев мочи проводится для уточнения половых инфекций, воспаления почек, органов урогенитальных путей.
3. Анализ кала. Применяется в отношении пациентов с воспалением кишечного тракта, осложнениями острых кишечных инфекций, подозрением на паразитарные инфекции. Одновременно изучают физические и химические параметры каловых масс.
4. Мазок из цервикального канала у женщин. Метод исследования помогает определить инфекции половых путей.
5. Исследование спермы, мазок из уретры, секрет простаты. Анализы на бактериальный посев применяются для уточнения инфекций различной локализации у мужчин.
6. Анализ мокроты. Помогает в диагностике дыхательных заболеваний, туберкулеза легких, пневмонии. Одновременно оценивают количество примесей — гноя, крови, слизи.

При хронических патологиях респираторного тракта и дыхательной системы возможно проведение забора мазка из носовых ходов, гортани. Анализ широко распространен в педиатрии ввиду легкости забора биологического материала.

Методы изучения материалов

Бакпосев выполняется несколькими способами, среди которых диско-диффузионный метод, Е-тест, метод разведения. В каждом случае выполняется определенный тип теста.

Дисковый способ

Распространенный и простой способ определения типа бактериальной микрофлоры. Исследуемый материал размещают в чаше Петри по всей поверхности, помещают небольшие картонные диски, смоченные в определенном виде антибиотика. После чашу плотно закрывают и устанавливают в термостат при температуре человеческого тела на 12 часов.

Бакпосев мочи назначается при подозрении на инфекции мочеполовых путей и урогенитального тракта

Под воздействием диффузных процессов антибактериального препарата формируется зона подавления патогенной микрофлоры. По окончанию анализа производят замер диаметра выявленной зоны подавления.

E-тест

Способ бакпосева похож на диско-диффузный, однако, вместо картонных дисков в чашу помещают специальную шкалу-полоску с различной интенсивностью пропитки антибиотиком. Посев инкубируют около 12 часов, после чего оценивают эффективность каждой пропитанной зоны полоски. Выбор антибиотика по результату теста зависит от выраженности зоны подавления на определенном участке полоски. Е-тест простой и доступный метод тестирования, но отличается высокой стоимостью.

Методы разведения

Анализ основан на последовательном двойном разведении антибиотика от максимальной к минимальной концентрации. 1 мл биоматериала разбавляют 10 раз в 10 пробирках с питательной средой. В той пробирке, где прекращается рост патогенной микрофлоры, обозначают максимальной границей количества патогенов в пробе. Этот же метод применяется для выявления чувствительности к антибиотикам.

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК)

Минимальная бактерицидная концентрация — наименьшая концентрация антибактериального вещества, которая уничтожает патогенные бактерии на 100%. Показатель МБК учитывают и в лечении тех пациентов, у которых отсутствует эффективность от ранее назначенной этиотропной терапии. Анализ на флору и МБК особенно применяют на фоне остеомиелита, генерализованного сепсиса или воспаления, бактериального миокардита, эндокардита.

Современные лаборатории оснащены необходимым оборудованием для определения типа и чувствительности бактерий. Получение результатов занимает 1-2 суток, что зависит от транспорта полученного материала и вида исследования.

Расшифровка результатов

Для определения чувствительности антибиотика оценивают зоны подавления роста колоний патогенных штаммов. Категории резистентности непостоянны, поэтому регулярно пересматриваются из-за изменения чувствительности к антибактериальным препаратам.

Анализ на флору постоянно применяется в различных медицинских сферах

Мутация патогенов вызвана и беспорядочным применением антибиотика без дополнительных исследований. Клиницисты выделяют несколько видов интерпретаций:

Оценка клинического метода основана на эффективности действия того или иного препарата. Микробиологическая интерпретация основана на распределении концентрации антибиотика и степени подавления патогенной активности в каждой концентрации. Благодаря микробиологической интерпретации подбирается доза препарата для достижения высоких терапевтических результатов.

Расшифровка по типу возбудителя

Проведение анализа на чувствительность к антибиотикам необходимо и при неясной природе воспалительного процесса. Учитывая, что после приема антибактериальных препаратов, патогенные штаммы могут мутировать, изменять состояние, то микроорганизмы классифицируют на устойчивые, чувствительные, условно-чувствительные.

Устойчивые

Устойчивые или резистентные бактерии характеризуются дальнейшим ростом и патогенной активностью даже на фоне приема максимальных доз препарата. В этом случае требуется длительное лечение, назначение комбинированных антибиотиков с различными концентрациями.

Условно-чувствительные

Условно-чувствительные или промежуточно-резистентные бактерии провоцируют различный терапевтический исход. Лечебный эффект достигается, благодаря повышению суточной дозы препарата, постоянной коррекции концентрации антибиотика.

В отдельных случаях резистентные и промежуточно-чувствительные бактерии объединяются в одну группу устойчивых штаммов. Лечение в таком случае носит эмпирический характер. Назначение минимальные дозы с их постепенным повышением. К таким возбудителям относятся хламидии, уреаплазма, микоплазма.

Чувствительные

Чувствительность бактерий к антибиотику характеризуется быстрым подавлением патогенной активности под воздействием минимальных или стандартных возрастных доз препарата. Для выздоровления достаточно одного медикаментозного курса.

Исходя из этой классификации, назначение антибиотиков не оправдано только на основании предъявляемых жалоб и клинической картины. Именно поэтому показано проведение бакпосева.

Полученные результаты исследования на бакпосев имеют клиническую значимость только на момент острого периода воспалительного процесса. Таким образом, при рецидиве инфекции через определенное время картина может значительно измениться, а назначенный ранее антибиотик станет неэффективным. При каждом обострении хронической инфекции показано проведение нового анализа.

Видео

Источник